無菌室一般是在微生物實驗室內(nèi)專辟一個小房間??梢杂冒宀暮筒AЫㄔ臁C娣e不宜過大,約 4 — 5 平方米即可,高 2.5米左右。無菌室外要設(shè)一個緩沖間,緩沖間的門和無菌室的門不要朝向同一方向,以免氣流帶進雜菌。無菌室和緩沖間都必須密閉。室內(nèi)裝備的換氣設(shè)備必須有空氣過濾裝置。
無菌室標準化規(guī)程與驗收規(guī)范。
1.目的
本規(guī)程旨在為無菌操作及無菌室的保護一個標準化規(guī)程。
2.適用范圍
生測實驗室
3.責任者
QC主管生測員
4.定義
無
5.安全注意事項
嚴格無菌操作,防止微生物污染;操作人員進入無菌室應先關(guān)掉紫外燈。
6.規(guī)程
6.1.無菌室應設(shè)有無菌操作間和緩沖間,無菌操作間潔凈度應達到10000級,室內(nèi)溫度保持在20-24℃,濕度保持在45-60%。凈臺潔凈度應達到100級。
6.2.無菌室應保持清潔,嚴禁堆放雜物,以防污染。
6.3.嚴防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染,已污染者應停止使用。
6.4.無菌室應備有工作濃度的消毒液,如5%的甲酚溶液,70%的酒精,0.1%的新潔爾滅溶液,等等。
6.5.無菌室應定期用適宜的消毒液滅菌清潔,以保證無菌室的潔凈度符合要求。
6.6.需要帶入無菌室使用的儀器,器械,平皿等一切物品,均應包扎嚴密,并應經(jīng)過適宜的方法滅菌。
6.7.工作人員進入無菌室前,必須用肥皂或消毒液洗手消毒,然后在緩沖間更換工作服,鞋,帽子,口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭雙手),方可進入無菌室進行操作。
6.8.無菌室使用前必須打開無菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上,并且同時打開凈臺進行吹風。操作完畢,應及時清理無菌室,再用紫外燈輻照滅菌20分鐘。
6.9.供試品在檢查前,應保持外包裝完整,不得開啟,以防污染。檢查前,用70%的酒精棉球消毒外表面。
6.10.每次操作過程中,均應做陰性對照,以檢查無菌操作的可靠性。
6 .11.吸取菌液時,必須用吸耳球吸取,切勿直接用口接觸吸管。
6.12.接種針每次使用前后,必須通過火焰灼燒滅菌,待冷卻后,方可接種培養(yǎng)物。
6.13.帶有菌液的吸管,試管,培養(yǎng)皿等器皿應浸泡在盛有5%來蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒,24小時后取出沖洗。
6.14.如有菌液灑在桌上或地上,應立即用5%石碳酸溶液或3%的來蘇爾傾覆在被污染處至少30分鐘,再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時,應立即脫去,高壓蒸汽滅菌后洗滌。
6.15.凡帶有活菌的物品,必須經(jīng)消毒后,才能在水下沖洗,嚴禁污染下水道。
6.16.無菌室應每月檢查菌落數(shù)。在凈工作臺開啟的狀態(tài)下,取內(nèi)徑90mm的無菌培養(yǎng)皿若干,無菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml,放至凝固后,倒置于30~35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時,證明無菌后,取平板3~5個,分別放置工作位置的左中右等處,開蓋暴露30分鐘后,倒置于30~35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時,取出檢查。100級潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得過1個菌落,10000級潔凈室平均不得過3個菌落。如過限度,應對無菌室進行消毒,直至重復檢查合乎要求為止。
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